牦牛血抗氧化低聚肽的稳定性及与其他食源性低聚肽抗氧化互作分析

材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料与试剂 牦牛血，四川省大渡河食品有限公司生产;碱性蛋白酶，活性为85.61 U/mg，上海楷洋生物技术有限公司生产;枯草芽孢杆菌SICC1.197，四川省工业微生物资源平台菌种保藏管理中心提供;其他化学试剂，国产分析纯;大豆低聚肽，分子量 <1 ku，西安百川生物科技有限公司生产;鱼胶原低聚肽，分子量<1 ku，济南东轩生物工程有限公司生产。

1.1.2 主要仪器设备 台式高速冷冻离心机，H2050R型，长沙湘仪离心机仪器有限公司生产;恒温振荡培养箱，QYC-2102C型，上海福玛实验设备有限公司生产;紫外可见分光光度计，UV Power型，北京莱伯泰科仪器股份有限公司生产;冷冻干燥机，LGJ-50F型，北京松源华兴科技发展有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 菌酶联合法制备牦牛血抗氧化低聚肽 采用笔者所在试验组前期研究的菌酶联合法[1]制备牦牛血抗氧化低聚肽。将前期制备所得的枯草芽孢杆菌菌液（1×109 CFU/mL）以接种量为2.5 mL/100 mL加入底物浓度为75 g/L的高压灭菌（121 ℃，15 min）牦牛血液中，在35 ℃、135 r/min下恒温振荡培养72 h，发酵结束后经高压灭菌（121 ℃，15 min）得到牦牛血发酵液。待牦牛血发酵液冷却后加入碱性蛋白酶，在酶底比为190 U/g、pH值为9.5、60 ℃的条件下进行酶解3 h，酶解结束后用沸水水浴灭酶活10 min，得到牦牛血酶解液。将牦牛血酶解液在4 ℃、6 000 r/min条件下离心15 min，取上清液用0.45 μm水性微孔滤膜抽滤去除菌体残渣，再将滤液置于5 ku超滤管中在4 ℃、4 000 r/min条件下离心10 min，取上清液得到分子量<5 ku的牦牛血低聚肽;进一步将肽液置于1 ku超滤管中在4 ℃、4 000 r/min条件下离心30 min，得到分子量<1 ku的牦牛血低聚肽。

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